Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐拓展

从第一次消失家兔自身HIV到消失1同型肝炎药理学疼痛的困难重重率在儿童以前就有良好的刻画，多个家兔自身HIV乙同型肝炎的儿童中会曾70%在HIV切换后10天内患上肝炎，而随访15年的儿童这一百分比上升到84%。相对之下，占药理学1同型肝炎一半以上的同型1同型肝炎的中风机制还没有给与充分的研究课题。

更多的人开始使用有种系统种系统来下定义1同型肝炎的困难重重：形态在消失多种家兔自身HIV时转回第1阶段，消失棒状温所致时转回第2阶段，消失疼痛时转回第3阶段。一些多发家兔自身HIV乙同型肝炎的形态，在1期和2期，困难重重较快，并演进为中风的1同型肝炎。我们之后刻画了一两组在首次检测到多种家兔自身HIV样品后将近10年无肝炎的近乎快困难重重者，这两组高血压人数极少，但特征十分一致。随后，我们找到家兔自身复合物基因表达CD8+T细胞膜反应以在困难重重平稳的高血压中会基本上不长期存在，但在近来中风和起因于的肝炎高血压中会很容易检测到。这可能断定，与困难重重高血压相对，这些高血压神经性反应以的可调增强。

早期研究课题断定，尽管可调性T细胞膜(Treg)数量长整整，但肝炎高血压长期存在一些动态毛病，其中会包括对IL-2的反应以意志力增大。此外，肝炎高血压中会的现象CD4+T细胞膜可能对可调突显抵抗性，发挥为现象T细胞膜的消除消散，共存转化成的Treg和棒状外转化成的抑止Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞膜中会IL-2反应以消散。本研究课题的目的是刻画了CD4+可调性T细胞膜(Treg)在大群近乎平稳困难重重者中会的特征，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁以下确诊的高血压亲属中会定期检查1同型肝炎的生命危险因素。我们之后刻画了长期平稳困难重重者的特征，他们维持多重家兔自身HIV乙同型肝炎大约10年，但没有消失肝炎的药理学疼痛，快性或非顺利完成性神经性。随后，10名继续维持无肝炎并愿意提供大量血液样品的平稳困难重重者划入T和B细胞膜动态量化。在现今的研究课题中会，8名快困难重重者(SP两组)，中会位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的家兔自身HIV乙同型肝炎。所有的旁观者都处于1同型肝炎困难重重的1期，尽管一些人随后得不到了家兔自身HIV对某些复合物的乙同型肝炎反应以，然而，一名高血压已经处于2期将近6年，但没有消失药理学疼痛，一名高血压被诊断为肝炎，该受试者72岁，在通过观察试验中样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中会对该丝氨酸顺利完成了单独风险评估。分离出来外周血单个核细胞膜(PBMCs)，转用多最简单流式细胞膜忍术和T细胞膜消除试验风险评估丝氨酸中会Treg的kHz、表同型和动态。使用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)顺利完成无行政官员聚类量化，风险评估Treg表同型。

结果：与肥胖丝氨酸相对，来自快困难重重棒状的梦境CD4+T细胞膜的行政官员聚类推测，激能活的梦境CD4+ TregkHz上升，与利尿剂抑止的TNFR就其蛋白(GITR)隐含上升有关。一名HbA1c增大的高血压与困难重重平稳者和最简单的对照两组相对，Treg谱有所不尽相同。动态量化断定，与肥胖丝氨酸相对，来自平稳困难重重棒状的Treg内皮细胞的CD4+现象T细胞膜消除显著受损。发挥为对现象CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的消除上升。

布1 深入的表同型量化推测，CD4+TregHIV-在快困难重重队列中会上升。由FlowSOM切换成的Treg四楼，聚集在来自所有丝氨酸的能活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上面物隐含认定出10个元簇:梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;文件种系统Treg_1;文件种系统Treg_2;文件种系统Treg_3;和文件种系统Treg_4。(a)使用9个不尽相同Treg上面切换成的10个元簇的MST。每个路由亦然一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在路由两组一处上色。每个路由中会的粥布问到单个上面的隐含级别。(b)每个元聚类的热布，以推测整棒状上面隐含。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)切换成布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较数量级为每个metacluster箱支线布(数量级> 0.05%)相符为HD和SP两组:文件种系统Treg_2 (e),文件种系统Treg_3 (f),文件种系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞膜(l)。蓝色红色亦然捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩鉴定。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 使用CITRUS的预测模同型证实，TregkHz的上升是困难重重平稳的标志。级别离子通道(a - f)和葡萄量化(g-k)比较SP旁观者和最简单的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的亦然性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利完成分离出来，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(小点)和SP(布氏)两组以及丝氨酸SP 606(蓝色)中会CD25+ cd127的kHz摘要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道弟集的箱支线布;(c) HLA-DRloGITR−(文件种系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件种系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件种系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件种系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含风力后处理，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列彼此之间的不尽相同。(j)箱支线布推测了在SP(布氏)和HD(灰点)两组中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相较数量级(百分比)。(k)直方布推测每个簇的表同型(紫色)和Treg上面相较隐含与历史背景隐含(黄色);上列，文件种系统Treg_3;示意图恰巧，文件种系统Treg_4。历史背景与所有其他簇中会上面的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩鉴定

布3 与肥胖献血者相对，困难重重平稳者梦境treg的GITR上升。每个梦境CD4+T细胞膜元簇(梦境T细胞膜_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞膜;HLA-DR + GITR +梦境T细胞膜;文件种系统Treg_2;文件种系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热布(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR隐含串接，推测直方布(c)和摘要布(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和鉴定，p< 0.07(蓝色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和最简单的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从级别离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(蓝色)串接，推测直方布(e)和摘要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩鉴定

布4 来自平稳困难重重的CD4+ treg细胞膜操控现象CD4+T细胞膜的意志力增大。SP两组用黄色的支线和红色问到，HD两组用紫色的支线和红色问到，蓝色的支线/红色问到丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被上面为CFSE, Treg按观察的百分比试样。用抗CD3 /28微珠激能活细胞膜，培养3天后顺利完成流式细胞膜忍术检测。(a-d)与CD4+应以答者相较应以的treg培养(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除比率。使用乙同型肝炎对照(激能活的作出反应以细胞膜不含treg)计算出来消除比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 现象CD4+T细胞膜对平稳困难重重的T细胞膜激能活的消除更脆弱。SP两组用黄色的支线和红色问到，HD两组用紫色的支线和红色问到，蓝色的支线/红色问到丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel上面，treg按观察的百分比试样。用抗CD3 /28微珠激能活细胞膜，培养3天后顺利完成流式细胞膜忍术(CD25反染)和细胞膜因弟量化。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除调升(b)。(c,d) CD25消除调升(c)和CD134消除调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自平稳困难重重弟的激能活梦境CD4+Treg在GITR隐含中会给与了扩展和比较丰富，强调了全面研究课题Treg在1同型肝炎风险形态中会的异质性的必要性。

中会文翻译记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28